méhnyakrák - Deutsch-Übersetzung – Linguee Wörterbuch

Hpv schutz módon, Humane Papillomviren Magyar - Német-Magyar Szótár - Glosbe

hpv schutz módon

Az E7 transzformáló aktivitását részben a retinoblasztóma Rb tumor szupresszorával való kölcsönhatásnak tulajdonította; azonban az Rb kölcsönhatás önmagában nem elegendő az E7 átalakításához. A HPV E7 cellás célpontjainak képernyőjén azonosítottuk a Ski interakciós fehérjét, a Skip-ot, mint az E7 új hpv schutz módon lépő partnere.

Az E7 funkcionálisan célpontokat hagy ki in vivo, és gátolja a transzkripciós aktivációs aktivitását. Az E7 két transzformációs hibás mutánsát azonosítottuk, amelyek mindkettőjüket nem követték el a Skip és a transzkripciós aktivitás gátlására.

Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a Skip funkció gátlása hozzájárulhat a HPV E7 sejtek transzformációjához. Bevezetés A humán papillomavírus HPV a méhnyak diszplázia és a méhnyakrák etiológiájában okozó hatású.

A nagy kockázatú HPV propolisz tinktúra pinwormok ellen HPV gyakran rosszindulatú daganatokban észlelhető, és a méhnyakrákok többségével társultak zur Hausen és Schneider, Ezzel szemben az alacsony kockázatú HPV-6 és a HPV a jóindulatú genitális szemölcsökkel jár együtt, és a daganatokban nagyon ritkán fordulnak elő.

A vírus két fő oncoproteint, E6 és E7 kódol, amelyek mindkét esetben folyamatosan megmaradnak és expresszálódnak a méhnyakrákban Androphy és munkatársai, ; Banks és munkatársai, ; Smotkin és Wettstein, Emellett kimutatták, hogy a HPV E6 és E7 együttes expressziója elegendő a primer humán keratinociták immortalizálásához Hawley-Nelson és mtsai.

Az E6 és E7 fehérjék együttműködve hatnak a celluláris tumorszuppresszor fehérjék, a p53 és a pRb funkcióira Dyson és munkatársai, ; Werness és munkatársai, Számos megállapítás azonban arra utal, hogy a zsebfehérjék nem az E7 egyedüli celluláris célpontjai, amelyek a transzformáló aktivitáshoz szükségesek.

Például az E7 pRb-kötő-defektív mutánsa az E6-val együttműködve továbbra is immortalizálhat primer humán keratinocitákat Jewers et al. Emellett a CR1 vagy az E7 karboxil-terminális régiójának deléciós mutánsai jelentősen csökkentik transzformációs kapacitását, miközben megtartják a pRb kötődésének képességét Edmonds és Vousden, ; Watanabe és munkatársai, ; Barbosa és munkatársai, Banks és mtsai.

Végül egy újabb tanulmány kimutatta, hpv schutz módon a HPV E7 proliferációjának stimulációja nem korrelál közvetlenül a pRb kötéssel Caldeira et al. Ezek a megfigyelések arra utalnak, hogy az Rb-kötő doménen kívüli régióknak fontosnak kell lenniük a HPV E7 transzformációs potenciáljához. Azonban, hogy ezek a régiók hogyan járulnak hozzá az átalakuláshoz, rosszul értik. Az E7 új sejtes célfehérjéinek felfedezésére két hibrid képernyőt hajtottunk végre, amely HPV E7-et használtak csaliként, és most már azonosítottuk a Skip-t Ski interacting proteinmint egy új kölcsönhatásba lépő partnert az E7-nek.

Az ugrást eredetileg a vírus onkogén, v-Ski Dahl és munkatársai, kötőpartnereként azonosították, és a közelmúltban kimutatták, hogy a Skip számos transzkriptoron egy transzkripciós ko-aktivátor jellemzőivel rendelkezik Baudino et. Az E7 mutánsait azonosították, amelyek nem lépnek kölcsönhatásba a Skip-szal, és ezek szintén csökkent transzformációs aktivitást mutatnak. Az E7 kötőhelyét egy prolinban gazdag szekvenciára PRS leképezték a Skip erősen konzervált SNW doménjében, ami arra utal, hogy ez a fehérje funkcionálisan fontos régiója.

Végül megmutatjuk, hogy ennek az interakciónak az eredményeként az E7 ellenáll a Skip coactivator aktivitásának. Az E7-es kéthibrid képernyõ azonosította a ugrást kódoló ugyanazon cDNS-klón három klónt, amelyet eredetileg v-Ski-interakciós fehérjeként azonosítottak Dahl et al. A p-galaktozidáz vizsgálat eredményeit az 1. Skip Teljes méretű kép Annak érdekében, hogy azonosítsuk a HPV E7 régióját, ami szükséges hpv schutz módon Skip-hoz való interakcióhoz, az E7 két deléciós konstrukcióját is magába foglalta, amelyek az 1— És 27— Amint az 1.

Aminosavak nem mutatott kölcsönhatást, míg a karboxi-terminális rész 27— Aminosavak interakció vad típusú szinteket mutatott. Ez azt jelenti, hogy a es aminosavból származó E7-es rész fontos a Skip-val való kölcsönhatás szempontjából.

A bakteriálisan expresszált GST vagy GST E7 fúziós fehérjéket glutation-agarózon immobilizáltuk, majd in vitro transzlált 35 S-metionin-jelzett Skip fehérjével kevertük. Amint az a 2. Ugyanakkor sem az élesztőben való in vivo kölcsönhatás, sem az in vitro transzlációval végzett GST-húzási vizsgálat nem zárja ki annak lehetőségét, hogy ez az interakció egy közbenső fehérjén keresztül történjen.

Kiterjedt mosás után az E7-tartalmú mennyiséget elektroforézissel és Western-blottal határoztuk meg anti-HPV E7 antitesttel. A kapott eredményeket a 3. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az E7 és a Skip közötti kölcsönhatás közvetlen, és nem más fehérje által közvetített.

A HPV E7 kölcsönhatása in vitro in vitro. GST-pull down assay-t végeztünk úgy, hogy a tisztított GST-E7 fehérjét inkubáltuk in vitro transzlációval, egyidejűleg szobahőmérsékleten. Ezután 40 ng rekombináns tisztított His hpv schutz módon E7-et inkubáltunk szobahőmérsékleten 1 órán át. Kezünkben ez úgy tűnik, hogy a Skip általános aktivitása, amelyet a Cell Ski Prathapam et al. Amint a 4.

Ezzel ellentétben az E7 reagáló AdE2 promótert alkalmazó párhuzamos vizsgálat önmagában E7 jelenlétében jelentős transzkripciós giardia pata speciala mutatott, összhangban a korábbi megfigyelésekkel Phelps és munkatársai,amely bemutatja a vizsgálatban használt E7 fehérje funkcionalitását.

A HPV E7 gátolja a transzkripciós aktivitás átugrását.

hpv schutz módon

A felső panel egy reprezentatív vizsgálat eredményeit mutatja, az alsó panel pedig legalább három független hpv schutz módon eredményeit mutatja.

A standard eltérések jelennek meg Teljes méretű kép Annak megállapítására, hogy a pRb részt vett-e ebben az E7 aktivitásban, a transzkripciós gátlási vizsgálatot Saos-2 sejtekben végeztük, amelyeknek nincs semmilyen funkcionális pRb. Ebben az hpv schutz módon az AdE2 promótert alkalmaztuk, amely nem reagál E7-re ezekben a sejtekben a pRb hiánya miatt.

Amint az 5. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az E7-Skip interakció egyik következménye a Skip azon képességének gátlása, amely aktiválja az expressziót bizonyos cél promoterekről.

hpv schutz módon

A standard eltérések jelennek meg Teljes méretű kép Az átkötő kötő domén azonosítása a HPV E7-en Annak megállapítására, hogy az E7 képes-e megkötni és inaktiválni a Skip transaktivációt, fontos lehet az onkogén potenciálja szempontjából, az E7 számos transzformációs-defektív mutánsát elemezték, hogy képesek-e kölcsönhatásba lépni a Skipval.

A HPV E7 szerkezetét és a vizsgálatban használt mutánsokat vázlatosan a 6a.

hpv schutz módon

Ábrán mutatjuk be. Amint az a 6b. Mindkét mutáns jelentősen csökkent transzformációs aktivitást mutat Barbosa és munkatársai, ; Massimi és mtsai. A számok az aminosavmaradékokra utalnak, és hpv schutz módon AdE1a-val homológiát megosztó domének láthatóak. A BRK sejtek transzformációjában az E7 mutánsok fenotípusa látható.

hpv schutz módon

Megmutatjuk továbbá a Skip-val való kölcsönhatások összefoglalását is, ahol a két hibrid képernyőn látható kölcsönhatás jelzi, és b az in vitro kötési vizsgálatokban megfigyelt kölcsönhatásokat jelzi. A glutation gyantán tisztított GST fúziós fehérjéket 1 órán át szobahőmérsékleten inkubáltuk az in vitro transzlációval. Amint a 7. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az E7 mutánsai, amelyek nem tudnak megkötni a Skip-ot, szintén hibásak a Skip-Ski transzaktiváció visszaszorításában.

hpv schutz módon

Ez arra enged következtetni, hogy az E7 ugrásszerű transzkripciós aktivitásának elnyomása az E7-nek a Skiphoz való kötődésének következménye. Az E7 mutánsok funkcionális elemzése negatív a Skip kötéshez. A grafikon az összesített eredményeket mutatja legalább három független transzfekcióból. A standard eltérések jelennek meg Teljes méretű kép Az E7-ös kötési motívum azonosítása a Skip-on Miután a Skip-ot az E7 funkcionális célpontjaként azonosítottuk, azt akartuk azonosítani a Skip résztvevői potenciális motívumait, amelyek részt vettek az E7-vel való kölcsönhatásban.

Ezért először egy sor Skip törlési konstrukciót készítettünk, és ezeket a 8a.

A HPV-16 E7 onkoprotein kötődik. Átugrani és elnyomja a transzkripciós aktivitását

A különböző Skip törlési mutánsokat in vitro transzláltuk és 35 S-metioninnal jelöltük. A kapott eredményeket a 8b. Ábra mutatja. Ábra, 1. Ezen túlmenően az 1— mutáns interakciós szinteket mutatott 2. Érdekes, hogy a — aminosavakat tartalmazó mutáns lényeges kötődést tartott fenn a GST-húzás lefutási vizsgálatában 5.

A Hpv schutz módon E7-kötő motívumainak további meghatározásához további Skip deléciós konstrukciókat készítünk, és a GST-húzó lefolyású vizsgálatokat végeztük, és a kapott eredményeket a 8c. Erős kötődés volt megfigyelhető a wt Skip alkalmazásával, és csak nagyon kevés kötődést kaptunk az 1— mutánssal.

Humane Papillomviren Magyar - Német-Magyar Szótár - Glosbe

Továbbá az 1— mutáns minimális kötődést mutat az E7-hez 8c. Ábra, 3. A legérdekesebb, hogy az 1—as mutáns, amely tartalmazza a prolinban gazdag szekvenciát PRSmegtartotta a vad típusú kötődési szinteket 4. Az 1—es mutáns, amely szintén tartalmazza a PRS-t, szintén vad típusú kötődési aktivitást mutatott az E7-re 5.

Salus Herz-Schutz (szívvédő) kapszula

A b és c alsó panelek a kötési vizsgálatban használt gélek Coomassie Blue foltját mutatják Teljes méretű kép Vita Számos tanulmány arra utalt, hogy a HPV E7 kritikus szerepet játszik a méhnyakrák kialakulásában a pRb inaktiválásával. Azonban nagy mennyiségű bizonyíték arra utal, hogy a pRb inaktiválása szükséges, de nem elegendő a transzformációhoz Edmonds és Vousden, ; Banks és mtsai, ; Watanabe és munkatársai, ; Jewers et al.

Itt látható, hogy az E7 fehérje célpontja a Skip, egy nemrégiben azonosított transzkripciós koaktivátor. A kiugrást eredetileg a v-Ski interakciós fehérjévé azonosították, a madár Sloan Kettering vírusok onkogénjét Dahl és hpv schutz módon,amelyről kimutatták, hogy a csirke embrió fibroblasztjait transzformálja Stavnezer és mtsai.

Érdekes, hogy a Skip-ot úgy találták, hogy kölcsönhatásba lép egy olyan, nagyban konzervált Ski régióval, amely a transzformáló tevékenységéhez szükséges Dahl et al. A v-Ski transzformáló aktivitása a pRb-tumor-szuppresszor fehérjével való kölcsönhatásnak és a pRb-közvetített transzkripciós represszió következményeinek Tokitou és mtsai. Továbbá, kimutatták, hogy a Skip szintén fontos a B-limfociták Epstein-Barr vírus által kódolt latencia fehérje EBNA2 által közvetített immortalizálásához Zhou és mtsai.

Az E7 és a Skip közötti kölcsönhatást először élesztő két hibrid képernyővel azonosítottuk. Ezt először GST-húzási vizsgálatokkal igazoltuk in vitro helmintiaza pinworm, majd egy közvetlen interakciós vizsgálattal rekombináns His 6 E7 alkalmazásával.

A nem-onkogén HPV E7 és a Skip gyenge kölcsönhatása azt sugallta, hogy a HPV E7 kölcsönhatása a Skip-mal magas kockázatú vírusspecifikus, és ezért az onkogén funkciójához kapcsolódik. Ezt megerősítette az E7 mutációs analízise az E7 számos transzformációs-defektív mutánsával.

Mindkét mutáns szintén jelentősen hpv schutz módon a sejtek transzformálására. Ezek az eredmények felvetik annak a lehetőségét, hogy az E7 képessége, hogy megszüntesse a Skip funkciót, hozzájárulhat az átalakító tevékenységhez. Ez is alátámasztja azt a hipotézist, hogy az E7-nek számos különálló szabályozási útvonalat kell elforgatnia az emlőssejtek transzformálására.

A Skip ezen régiója evolúciósan erősen konzervált Hpv schutz módon és munkatársai,és azt hpv schutz módon, hogy az E7 a fehérje funkcionálisan fontos doménjét célozza.

Jelenleg tanulmányok folynak, hogy ezt tovább vizsgálják. Az E7 mutánsai, amelyek nem lépnek kölcsönhatásba a Skip-szal, nagymértékben csökkentik a sejtek transzformációjának képességét, ami arra utal, hogy ez a kölcsönhatás fontos a transzformáló aktivitás hpv schutz módon.

Anyagok és metódusok Élesztő két hibrid képernyő Az élesztő két hibrid rendszerét humán limfoid sejtkönyvtár szűrésére használtuk Durfee és munkatársai, Körülbelül 2 × transzformánsot szélesztettünk a szintetikus teljes SC táptalajra, amely nem tartalmaz triptofánt, leucint és hisztidint, de a szelekcióhoz 25 mM 3-amino-triazolt Sigma tartalmazott.

A kiválasztott kolóniákat ezután β-galaktozidáz-vizsgálatban analizáltuk. A képernyő megerősítéséhez a 3-amino-triazol-rezisztens és β-galaktozidáz-pozitív kolóniákból származó plazmidokat Escherichia coli DH5a-ban megmentettük, majd S.

E7 deléciós mutánsai. Ezeket a kereszteket β-galaktozidáz assay-vel analizáltuk, amint azt korábban leírtuk Kühne és Banks, Az ebben a vizsgálatban használt különböző Skip expressziós plazmidokat a pcDNA 3. Ezeket a konstrukciókat DNS-szekvenálással ellenőriztük a didezoxi-lánc hpv schutz módon módszerrel Sanger és mtsai.

Az ebben a vizsgálatban használt HPV E7 mutánsokat korábban leírták Edmonds és A condyloma bushke levenshtein kezelése, ; Banks és munkatársai, ; Barbosa és munkatársai, ; Massimi és mtsai. A transzfekciókat standard kalcium-foszfát-kicsapással végeztük 1 µg riporter plazmiddal kivéve, ha másként jelezzük együtt a jelzett mennyiségű expressziós plazmiddal együtt.

A BRK sejt transzformációs vizsgálatokat a korábban leírtak szerint végeztük Massimi és mtsai. In vitro fordítások és GST-húzási vizsgálatok 35 S-jelzett fehérjét in vitro termeltünk egy kapcsolt transzkripciós transzlációs rendszer TNT, Promega alkalmazásával, a gyártó utasításainak megfelelően.

A fúziós fehérjéket az előzőekben ismertetett módon indukáltuk és tisztítottuk Prathapam és munkatársai, A közvetlen kötődési vizsgálathoz a hisztidin-jelzett HPV E7 fehérjét a korábban leírtak szerint tisztítottuk Kühne és Hpv schutz módon, Az His- 6- E7-et az His-címkével ellátott HPV E7 elleni poliklonális ellenanyag alkalmazásával detektáltuk, majd az ECL detektáló rendszer alkalmazásával fejlesztettük ki a gyártó utasításai szerint Amersham.

Szeretnénk megköszönni Gianni del Sal-nak a pRb expressziós konstrukcióját és a Mauro Sturnega-t az antitestek előállításához nyújtott segítségért. Szeretnénk köszönetet mondani Miranda Thomasnak a kéziratra tett észrevételeiért. Népszerű Kategóriák.